中藥材從種植、生產(chǎn)、流通的全過(guò)程周期較長(zhǎng)，控制不當(dāng)易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的產(chǎn)生與宿主基質(zhì)特性密切相關(guān)，不同類(lèi)型中藥材會(huì)產(chǎn)生種類(lèi)和性質(zhì)各異的真菌毒素，方位加強(qiáng)中藥材中真菌毒素污染水平監(jiān)控成為《中國(guó)藥典》2020版的重中之重。

2020版《中國(guó)藥典》6月正式發(fā)布，自該標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布以來(lái)，中藥分析檢測(cè)工作者面臨了一系列的挑戰(zhàn)。為了宣貫2020年《中國(guó)藥典》的變化，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司開(kāi)展“2020年中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)解讀以及中藥檢測(cè)分析技術(shù)”專題培訓(xùn)班。針對(duì)此次培訓(xùn)，今天小編整理了老師們關(guān)注有關(guān)真菌毒素檢測(cè)的八大熱點(diǎn)問(wèn)題。

01 

Q:黃曲mei素檢測(cè)有哪些注意事項(xiàng)？怎么樣才能使測(cè)試結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠？

A:在測(cè)試黃曲mei素的時(shí)候需要注意如下幾點(diǎn)，這樣能保證測(cè)試的準(zhǔn)確性。

（1）取樣一定要均勻，對(duì)于性質(zhì)特殊的供試品，可適當(dāng)調(diào)整取樣量，像地龍比較粘稠的可以適當(dāng)調(diào)整取樣量，不過(guò)一般應(yīng)不低于5g；

（2）正確的測(cè)試免疫親和柱，可測(cè)柱回收率，考察免疫親和柱的性能；

（3）采用第yi法液相色譜法測(cè)定結(jié)果超出限度時(shí)，應(yīng)采用第二法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)；

（4）進(jìn)行真菌毒素檢測(cè)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有相應(yīng)的安全防護(hù)措施，不得污染環(huán)境；黃曲霉du素的毒性很強(qiáng)，需要采取必要的安全措施。建議設(shè)用單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)器材，不與別的實(shí)驗(yàn)一起混用；

（5）殘留有黃曲霉du素的廢液或者廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于儲(chǔ)存容器（裝有10%次氯酸奶溶液）內(nèi)，浸泡24h以上，再用清水將玻璃器皿清洗干凈。

02 

Q:真菌毒素實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中使用的對(duì)照品有什么要求？

A:（1）對(duì)照物質(zhì)應(yīng)能夠溯源量值，shou選使用法定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

（2）很多品種為劇du品，使用時(shí)應(yīng)加強(qiáng)安全防護(hù)；

（3）一般情況下不推薦使用固體純品，已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更為方便，也更為廣泛；

（4）針對(duì)很多劇毒成分，如黃曲霉du素，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液也能夠有效減少對(duì)檢驗(yàn)人員的安全風(fēng)險(xiǎn)。通常，首先配置成1-100ug/ml的濃溶液，作為儲(chǔ)備液使用。儲(chǔ)備液可保存在惰性，密封，避光，低溫環(huán)境下。儲(chǔ)備液的濃度，溶劑，配制日期應(yīng)詳細(xì)記錄，并在原始記錄中明確顯示，以便于溯源。儲(chǔ)備液的有效期應(yīng)根據(jù)穩(wěn)定性測(cè)試數(shù)據(jù)確定。

03

Q:中藥中痕量殘留量檢測(cè)分析中空白實(shí)驗(yàn)怎么防止污染與干擾？

A:防止污染與干擾是痕量分析質(zhì)量控制的重要內(nèi)容：

（1）避免交叉污染：樣品儲(chǔ)存需要采用通過(guò)密封或者分開(kāi)放置等方式防止樣品之間，防止樣品之間，樣品與潛在污染源之間的互相污染；實(shí)驗(yàn)室器皿建議，檢測(cè)所使用的器皿應(yīng)有針對(duì)性的仔細(xì)清洗，尤其需要避免標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，高濃度陽(yáng)性樣品與普通樣品間的交叉污染。實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)選擇適宜純度，并通過(guò)使用瓶口分液器等方式減少試劑瓶多次開(kāi)啟造成的試劑被污染。

（2）日常質(zhì)控要求：每次檢測(cè)均應(yīng)隨行空白實(shí)驗(yàn)，即不取樣，*按照供試品溶液制備程序操作并測(cè)定，以便反應(yīng)試劑，器皿，環(huán)境對(duì)測(cè)定的干擾情況。當(dāng)空白實(shí)驗(yàn)干擾峰峰面積（響應(yīng)值）不高于較準(zhǔn)曲線濃度低點(diǎn)峰面積（響應(yīng)值）的1/2時(shí)，可認(rèn)為無(wú)干擾。在試驗(yàn)操作過(guò)程中，通常按照空白實(shí)驗(yàn)，樣品測(cè)定，回收試驗(yàn)的順序操作，嚴(yán)格避免交叉污染。

04

Q:使用免疫親和柱的注意事項(xiàng)有哪些？樣品的PH在什么范圍時(shí)柱效是hao的？

A:在過(guò)免疫親和柱之前如果溶液不夠澄清的話，需要用離心或者玻璃濾紙過(guò)濾的方法使溶液澄清后再過(guò)免疫親和柱。建議使用前仔細(xì)閱讀使用的注意事項(xiàng)比如可冷藏不能冷凍，注意使用親和柱（shi合的PH值6-8）的時(shí)候先測(cè)一下樣品的PH值，是中性的話柱效果是hao的。在進(jìn)行回收率考察的時(shí)候先進(jìn)行柱回收率的考察，把適當(dāng)?shù)狞S曲mei素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液先通過(guò)免疫親和柱后進(jìn)行測(cè)試，考察一下免疫親和柱的性能，再考察整體的回收率。

05

Q:檢測(cè)限的確定需要做什么工作?準(zhǔn)確度和精密度嗎？檢測(cè)限的概念是應(yīng)該是定量限嗎？

A:檢測(cè)限（報(bào)告限）是指殘留量被作為數(shù)值報(bào)告的低濃度。檢測(cè)限一般等于或略高于低較準(zhǔn)濃度，具有可接受的準(zhǔn)確度和精密度，是高于實(shí)際方法定量限的一個(gè)固定數(shù)值。

當(dāng)MPL（大殘留量）≥0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)<1/10MRL；當(dāng)MPL<0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)≤1/3MRL。由于檢測(cè)限的設(shè)定，檢驗(yàn)人員不必每一次進(jìn)行樣品分析時(shí)都嚴(yán)格進(jìn)行LOQ測(cè)定，可以節(jié)省很多人力物力；同一體系內(nèi)部的各實(shí)驗(yàn)室間針對(duì)同一方法也可以設(shè)定一致的檢測(cè)限，這樣一來(lái)出具的報(bào)告具有了可比性，也便于統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)布結(jié)果。

06

Q:黃曲mei毒素方法驗(yàn)證中檢出限怎么做？

A:關(guān)于檢出限的概念容易混淆，檢出限有儀器檢出限和方法檢出限兩種。儀器檢出限僅僅反應(yīng)的是檢測(cè)系統(tǒng)的響應(yīng)，通常把標(biāo)準(zhǔn)品稀釋用3倍的信噪比的進(jìn)樣量來(lái)表示。方法的檢出限應(yīng)該是在空白基質(zhì)中定量的加入對(duì)照品，后按照供試品的提取方法進(jìn)行提取，然后進(jìn)行檢測(cè)分析，獲得1/10的信噪比。對(duì)應(yīng)的加入的對(duì)照品的濃度就是方法的檢出限。在20版在做黃曲霉mei毒素的測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議做儀器的檢出限，然后再折算成樣品的檢出限。

07

Q:不同基質(zhì)的中藥材中真菌毒素的檢測(cè)有什么不同？會(huì)因?yàn)榛|(zhì)不同而出現(xiàn)結(jié)果的差異嗎？

A:基質(zhì)效應(yīng)的影響因子是根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)因子進(jìn)行判斷的，基質(zhì)效應(yīng)是指在對(duì)分析物的濃度或質(zhì)量測(cè)定過(guò)程中，來(lái)自樣品中其它化合物的一種或者幾種綜合的影響。基質(zhì)因子是指空白樣品溶液加標(biāo)測(cè)定值與純?nèi)軇┡渲仆瑯訚舛葮?biāo)準(zhǔn)品溶液測(cè)定值的比值。機(jī)制效應(yīng)的評(píng)定采用的機(jī)制因子進(jìn)行評(píng)定的。不同品種，不同成分，基質(zhì)影響不同，有普遍偏低現(xiàn)象。如果機(jī)制效應(yīng)因子在85%-115%之間說(shuō)明機(jī)制效應(yīng)在不同的方法不存在顯著差異，不同的品種不同的材質(zhì)機(jī)制效應(yīng)是不同的。按照通則去做，不同基質(zhì)在液質(zhì)上會(huì)有基質(zhì)干擾，這個(gè)干擾的大小會(huì)因?yàn)榛|(zhì)不同而不同，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要針對(duì)不同基質(zhì)做一些方法上的改進(jìn)。例如地龍按藥典沒(méi)辦法提取，需要進(jìn)行一些實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化和調(diào)整的。

08

Q:怎么做一條好的校準(zhǔn)曲線？

A:校正曲線是用于描述待測(cè)物質(zhì)的濃度或量與相應(yīng)的測(cè)量?jī)x器的響應(yīng)量或其他指示量之間的定量關(guān)系的曲線。校準(zhǔn)曲線的制定需要滿足以下條件：線性范圍在檢測(cè)器jia響應(yīng)范圍內(nèi)；一般要求，低校準(zhǔn)濃度（CL）所對(duì)應(yīng)的樣品中待測(cè)物濃度應(yīng)≤1/10MRL（當(dāng)MRL≥0.1mg/kg時(shí)），或≤1/3MRL（MRL<0.1mg/kg時(shí)）。大殘留*（MRL）所對(duì)應(yīng)的供試品速溶濃度應(yīng)在校準(zhǔn)曲線的中間或偏上濃度位置；gao校準(zhǔn)濃度可根據(jù)樣品中待測(cè)物的可能殘留量及儀器的線性檢測(cè)能力設(shè)置為MRL的2-10倍；線性范圍一般無(wú)需強(qiáng)制通過(guò)原點(diǎn)，校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)一般不低于0.990；當(dāng)線性范圍超過(guò)1個(gè)數(shù)量級(jí)時(shí)，可使用分段校準(zhǔn)或采用加權(quán)校準(zhǔn)的方式，測(cè)量誤差小于簡(jiǎn)單的線性校準(zhǔn)；完成樣品測(cè)定或每完成一定批次樣品分析后，應(yīng)再次分析校準(zhǔn)曲線中的代表性濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（如MRL對(duì)應(yīng)的濃度點(diǎn)），響應(yīng)值和校準(zhǔn)曲線偏差應(yīng)在±15%以內(nèi)。